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Tipo: Dissertação
Título: Avaliação da capacidade imunomoduladora do antígeno recombinante rSm29 na hanseníase
Título(s) alternativo(s): Evaluation of the immunomodulatory capacity of the recombinant antigen rSm29 in leprosy
Autor(es): Vieira, Thaillamar
Primeiro Orientador: Castellucci, Léa Cristina de Carvalho
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Cardoso, Luciana Santos
metadata.dc.contributor.referee1: Pimentel, Bárbara de Castro Figueiredo
metadata.dc.contributor.referee2: Castellucci, Léa Cristina de Carvalho
metadata.dc.contributor.referee3: Trindade, Soraya Castro
Resumo: A Hanseníase é uma doença infecciosa crônica, insidiosa e de difícil tratamento, especialmente nas suas formas reacionais, o que tem instigado o desenvolvimento de novos fármacos, especialmente imunobiológicos no seu tratamento. O antígeno recombinante do Schistosoma mansoni (rSm29) tem apresentado função imunorreguladora, pela indução de IL-10 e capaz de modular respostas inflamatórias com perfil Th1 e Th2, demonstradas em doenças como asma, leishmaniose e HTLV-1.Com o objetivo de entender como este antígeno se comportaria na Hanseníase, este estudo buscou avaliar o papel modulador do rSm29 na doença.Foi realizado um estudo piloto, modelo transversal com casuística de 17 pacientes com hanseníase. Após coleta de sangue, ocorreu a separação das CMSPs e incubação por 72 horas em quatros grupos categorizados de acordo com diferentes estímulos: Sem estimulo, M. leprae, M. leprae+rSm29 e rSm29. Posteriormente, realizamos a extração de RNA com TRIzol, a conversão para cDna e PCR em tempo real (qRT- PCR) utilizando o método Taqman® para os genes alvos (TLR2, TLR4, IL-10 e TNF) e imunoensaio Bioplex® para dosar importantes marcadores imunológicos da doença. A expressão gênica do gene TLR2 foi maior no grupo co-estimulado com M. leprae + rSm29 em relação ao M. leprae e significativo quando comparado ao grupo não estimulado (meio) (p = 0,0317). Por outro lado, a expressão de TLR4 foi maior em culturas na presença do antígeno M. leprae em comparação com culturas não estimuladas (p = 0,0159) e co-estimuladas (p = 0,0317).Observamos também que a expressão do gene de IL10 foi maior nas culturas na presença dos antígenos e significativo quando comparado o M. leprae + rSm29 com culturas sem estímulo (p = 0,0159). Em relação à expressão do TNF, não houve variação significativa entre os grupos. Os resultados mostram diferenças significativas nas concentrações dos marcadores nos sobrenadantes co-estimulados com os dois antígenos em comparação ao M. leprae sonicado no grupo PB observadas em G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, TNF-α. 17.Além das diferenças significativas observadas nos mediadores da resposta imune anteriores, as citocinas e quimiocinas IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-, foram observados também diferença significante na estimulação apenas com o antígeno recombinante versus a condição M. leprae + rSm29 no grupo PB.Em conclusão principal, a adição do antígeno rSm29 ao M. leprae em cultura de pacientes com hanseníase colaborou ao desenvolvimento de uma resposta celular do tipo Th1. Essa resposta poderia ajudar pacientes com hanseníase a fazer um melhor controle da infecção micobacteriana, assim favorecendo a forma mais branda da doença.
Abstract: Leprosy is a chronic, insidious infectious disease that is difficult to treat, especially in its reactional forms, which has prompted the development of new drugs, especially immunobiologicals for its treatment. The antigen (rSm29) has been shown to have an immunoregulatory function, by immunoregulatory function, through the induction of IL-10 and capable of modulating inflammatory responses with a Th1 and Th2 profile, demonstrated in diseases such as asthma, leishmaniasis and HTLV-1. In order to understand how this antigen might behave in leprosy, this study sought to evaluate the modulatory role of rSm29 in the disease. A cross-sectional pilot study was carried out with 17 leprosy patients. After blood collection, the PSMCs were separated and incubated for 72 hours in four groups categorized according to different stimuli: No stimulus, M. leprae, M. leprae+rSm29 and rSm29. RNA was then extracted using TRIzol, converted to cDNA and PCR conversion to cDNA and real-time PCR (qRT-PCR) using the Taqman® method for the target genes (TLR2, TLR4, IL-10 and TNF) and the Bioplex® immunoassay to measure important immunological markers of the disease. Gene expression of the TLR2 gene was higher in the group co-stimulated with M. leprae + rSm29 compared to M. leprae and significant when compared to the non-stimulated group (medium) (p = 0.0317). On the other hand On the other hand, the expression of TLR4 was higher in cultures in the presence of the M. leprae antigen compared to unstimulated (p = 0.0159) and co-stimulated (p = 0.0317) cultures. We also observed that the expression of the IL10 gene was higher in cultures in the presence of the antigens and presence of the antigens and significant when comparing M. leprae + rSm29 with cultures (p = 0.0159). There was no significant variation in TNF expression between the groups. between the groups. The results show significant differences in concentrations of the markers in the supernatants co-stimulated with the two antigens compared to M. leprae sonicated in the PB group observed in G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, TNF-α. 17.In addition to the significant differences observed in the mediators of the response mediators, the cytokines and chemokines IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-, significant differences were also observed in the stimulation of the PB group. a significant difference was also observed when stimulated with the recombinant antigen alone versus the antigen alone versus the M. leprae + rSm29 condition in the PB group, the addition of the rSm29 antigen to M. leprae in a culture of leprosy patients contributed to the development of a Th1-type cellular response. This response could help leprosy patients to better control their mycobacterial infection, thus favoring the milder form of the disease.
Palavras-chave: Hanseníase
rSm29
resposta imune
TLR2
TLR4
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
Idioma: por
País: Brasil
Editora / Evento / Instituição: UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA
Sigla da Instituição: UFBA
metadata.dc.publisher.department: Faculdade de Medicina da Bahia
metadata.dc.publisher.program: Pós-Graduação em Ciências da Saúde (POS_CIENCIAS_SAUDE) 
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: https://repositorio.ufba.br/handle/ri/39923
Data do documento: 27-Ago-2020
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