Produção de quimiocinas induzida por duas cepas de corynebacterium pseudotuberculosis e caracterização de lipídios associados

Abstract

A linfadenite caseosa é uma doença infecciosa que afeta principalmente caprinos e ovinos, sendo caracterizada pela formação de lesões caseosas nos linfonodos externos e internos, assim como em alguns órgãos, tais como pulmão, fígado e baço. Essa doença tem alta prevalência na caprino-ovinocultura brasileira, sendo responsável por muitas perdas econômicas. Muito da relação bactéria/hospedeiro ainda não está bem estabelecida e pouco se sabe sobre imunidade inata e sobre os componentes de parede não proteicos específicos dessa bactéria. Este trabalho teve como objetivo analisar a participação de quimiocinas na resposta a Corynebacterium pseudotuberculosis e verificar diferenças nesse perfil imune após estimulação com cepas de diferentes graus de patogenicidade em modelo murino. Foi realizado estímulo de esplenócitos murinos com cepas bacterianas viáveis apresentando baixa e alta patogenicidade, denominadas T1 e VD57, respectivamente, e com extratos antigênicos das mesmas cepas. Após o estímulo, foi realizada a dosagem de quimiocinas utilizando a técnica de ELISA no sobrenadante proveniente do cultivo de células. Em relação aos extratos antigênicos utilizados, o antígeno lisado de T1 teve maior capacidade de estimulação de quimiocinas. Num segundo momento, levando em consideração esse resultado, foi feita uma purificação dos antígenos lisados de ambas as cepas de C. pseudotuberculosis para caracterização e diferenciação de suas moléculas não proteicas. Verificou-se que o método de purificação, utilizando solventes orgânicos, cromatografia de interação hidrofóbica e extração de gel, teve êxito e que as cepas apresentam diferentes perfis lipídicos, os quais podem influenciar a patogenicidade de cada cepa, provavelmente sendo responsáveis por gerar distintos perfis de indução das quimiocinas.

Caseous lymphadenitis is an infectious disease that occurs mainly in small ruminants, characterized by caseous lesions in internal and external lymph nodes, as well as in some organs such as lung, liver and spleen. This disease has a high prevalence in the Brazilian herd of sheeps and goats, provoking many economic losses. The relationship between parasite and host is unclear and little is known about innate immune response and non-proteinic components of the cell wall specific to this bacterium. The main target of this study was to analyze the involvement of chemokines in the response of Corynebacterium pseudotuberculosis and check in murine model the differences in this immune profile after stimulation with strains presenting different degrees of pathogenicity. Balb/c splenocytes were stimulated with bacterial strains showing low and high pathogenicity, called T1 and VD57, respectively, and with antigen extracts of the same strains. After this, the chemokines were dosed by ELISA technic in supernatant of culture cells. Regarding antigens extracts used, the T1 lysate antigen had greater capacity to chemokine stimulation. In a second time, considering this result, lysate antigens of both C. pseudotuberculosis strains were purified for characterization and differentiation of their non-proteinic components. It was found that the method of purification using organic solvents, hydrophobic interaction chromatography and gel extraction have been successful and the strains exhibited different lipid profiles, which can influence the pathogenicity of each strain, probably being responsible for generating distinct profiles in chemokine induction