Avaliação da atividade anti-inflamatória, antinociceptiva, antioxidante e toxicológica do extrato etanólico e das frações do caule e casca da Aeschynomene martii Benth

Abstract

A espécie vegetal a ser estudada, Aeschynomene martii Benth, do gênero Aeschynomene, família das Leguminosae, possuem compostos bioativos com grande potencial farmacológico a serem usados. O estudo teve como objetivo avaliar as atividades antinociceptiva, anti-inflamatória, antioxidante e toxicológica do caule e casca da A. martii Benth, coletada na região da Floresta Nacional Contendas do Sincorá (FLONA). O extrato etanólico foi preparado por maceração e submetido à extração por partição. Após a evaporação, foram obtidas as quatro frações do extrato bruto com os seguintes rendimentos: 13,21% (hexano), 40,92% (diclorometano), 30,68% (acetato de etila) e 8,10% (butanol) em relação ao peso do extrato bruto 17,03 g. A prospecção fitoquímica das frações foi realizada por CCD com reveladores específicos. As frações de hexano e diclorometano tiveram seus perfis cromatográficos avaliados por CG-EM com destaque para a identificação de: estigmasterol, -sitosterol, lupenona, 3,3',4',5,5',7-hexametoxiflavona, além dos ácidos graxos. A atividade antioxidante foi avaliada por teste do sequestro do radical livre DPPH, o extrato etanólico e as frações não apresentaram atividade antioxidante significativa (p < 0,05), além de serem classificadas quanto à concentração inibitória (boa, média e baixa, respectivamente). Para os ensaios antinociceptivo e anti-inflamatório foram utilizados camundongos machos adultos Balb/c. O efeito antinociceptivo foi avaliado pelos testes: Contorção abdominal induzido por ácido acético 0,6%, onde todas as frações (25 mg/kg) promoveram redução significativa das respostas nociceptivas (p < 0,05). Injeção intraplantar de formalina 1,5%, na fase 1 e 2, as frações (25 mg/kg) reduziram o número de “flinches”, em comparação ao controle negativo (p < 0,05), quando comparadas ao grupo controle positivo morfina, as frações de diclorometano e butanol não apresentaram diferença estatística (p < 0,05), o edema de pata formado reduziu significativamente nas frações (25 mg/kg) de hexano, diclorometano e acetato de etila (p < 0,05). No Von Frey eletrônico por injeção intraplantar de carragenina (Cg), todas as frações (25 mg/kg) foram capazes de reduzir significativamente a hipernocicepção (p < 0,05). Para a determinação da atividade anti-inflamatória foram realizados testes de: Migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal, onde todas as frações (25 mg/kg) apresentaram redução significativamente a migração de neutrófilos em (p < 0,05); Determinação dos níveis de nitrito, todas as frações (25 mg/kg) apresentaram redução significativa (p < 0,05). Avaliação da permeabilidade vascular por azul de Evans, que mostrou uma significativa redução do extravasamento do corante no líquido peritoneal (p < 0,05). Para determinação da toxicidade frente à Artemia salina Leach, as classificações de toxicidade das frações foram ativa no extrato etanólico e hexano, moderada em diclorometano e inativa em acetato de etila e butanol. Os resultados permitem considerar que a A. martii Benth é uma promissora fonte natural para a identificação de novos compostos bioativos e agentes terapêuticos, bem como uma espécie promissora para uso quanto fitoterápico.

The plant species to be studied, Aeschynomene martii Benth, of the genus Aeschynomene, family of Leguminosae, possess bioactive compounds with great pharmacological potential to be used. The objective of this study was to evaluate the antinociceptive, anti-inflammatory, antioxidant and toxicological activities of A. martii Benth stem and bark, collected in the Contendas do Sincorá National Forest region (FLONA). The ethanolic extract was prepared by maceration and subjected to partition extraction. After evaporation, the four fractions of the crude extract were obtained in the following yields: 13.21% (hexane), 40.92% (dichloromethane), 30.68% (ethyl acetate) and 8.10% (butanol) relative to the weight of the crude extract 17.03 g. The phytochemical exploration of the fractions was performed by CCD with specific developers. Fractions of hexane and dichloromethane had their chromatographic profiles evaluated by GC-MS, with the emphasis on the identification: stigmasterol, -sitosterol, lupenone, 3,3',4',5,5',7-hexamethoxyflavone, besides the acids fatty acids. The antioxidant activity was evaluated by the DPPH free radical sequestration test, the ethanolic extract and the fractions showed no significant antioxidant activity (p < 0.05), besides being classified as inhibitory concentration (good, medium and low, respectively). For the antinociceptive and anti-inflammatory assays adult male Balb/c mice were used. The antinociceptive effect was evaluated by the following tests: 0.6% acetic acid-induced abdominal contortion, where all fractions (25 mg/kg) promoted a significant reduction in nociceptive responses (p < 0.05). Intraplantar injection of formalin 1.5%, in phases 1 and 2, the fractions (25 mg/kg) reduced the number of flinches in comparison to the negative control (p < 0.05), when compared to the positive control group morphine, dichloromethane and butanol fractions did not present statistical difference (p < 0.05), the paw edema formed significantly reduced in the fractions (25 mg/kg) of hexane, dichloromethane and ethyl acetate (p < 0.05). In the electronic Von Frey by intraplantar injection of carrageenan (Cg), all fractions (25 mg/kg) were able to significantly reduce hypernociception (p < 0.05). For the determination of anti-inflammatory activity, tests were performed: Neutrophil migration to the peritoneal cavity, where all fractions (25 mg/kg) showed a significant reduction in neutrophil migration in (p < 0.05); Determination of nitrite levels, all fractions (25 mg/kg) presented a significant reduction (p < 0.05). Evaluation of vascular permeability by Evans blue, which showed a significant reduction of dye extravasation in the peritoneal fluid (p < 0.05). To determine the toxicity to Artemia saline Leach, the toxicity classifications of the fractions were active in ethanolic extract and hexane, moderate in dichloromethane and inactivated in ethyl acetate and butanol. The results allow us to consider that A. martii Benth is a promising natural source for the identification of novel bioactive compounds and therapeutic agents, as well as a promising species for use as a herbal remedy.