Desenvolvimento de um método molecular rápido para avaliação da viabilidade de bactérias redutoras de sulfato e sua utilização na seleção de biocidas

Abstract

Bactérias redutoras de sulfato são organismos nocivos à indústria de petróleo, pois produzem sulfeto de hidrogênio que acidifica os reservatórios (souring), aumenta a concentração de enxofre e dessa forma reduz a qualidade do óleo extraído e também são responsáveis pela corrosão influenciada microbiologicamente, a qual gera prejuízos estimados de 276 bilhões de dólares por ano apenas nos Estados Unidos. Os métodos rotineiramente utilizados para detectar e quantificar esses organismos são trabalhosos e envolvem longos períodos. Foi desenvolvida uma metodologia de real time PCR (qPCR) associada a monoazida de propídio (PMA) para a avaliação da viabilidade da bactéria redutora de sulfato Desulfovibrio vulgaris, a qual foi submetida a um tratamento térmico de letalidade bem como após a aplicação de ácido tricloroisocianúrico (TCICA) nas concentrações de 500, 50 e 5 ppm. Após otimizada a metodologia de PMA-qPCR para essa espécie, foi possível detectar reduções de 3 Log com amostras contendo 105–108 bactérias submetidas ao tratamento térmico e 50 μM de PMA. Esse resultado corresponde a redução de 99,9% das bactérias presentes nas amostras. Quando as culturas foram expostas ao biocida TCICA, não houve redução estatisticamente significativa nas três concentrações testadas. A qPCR desenhada para o estudo apresentou boa eficiência (96-100%), sendo que os resultados obtidos pela técnica do número mais provável não diferiram dos da qPCR (p > 0,05). Os resultados obtidos sugerem que a metodologia de PMA-qPCR é um método rápido para quantificação de viabilidade microbiana em amostras de Desulfovibrio vulgaris pouco concentradas.