Skip navigation
Universidade Federal da Bahia |
Repositório Institucional da UFBA
Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://repositorio.ufba.br/handle/ri/38736
Tipo: Tese
Título: estudo do potencial da emetina em eliminar céluas-tronco leucêmicas de leucemia mieloide aguda.
Autor(es): Silva, Suellen Laila Rocha
Primeiro Orientador: Bezerra, Daniel Pereira
metadata.dc.contributor.referee1: Barbosa, Cynara Gomes
metadata.dc.contributor.referee2: Militão, Gardenia Carmen Gadelha
metadata.dc.contributor.referee3: Ferreira, Paulo Michel Pinheiro
metadata.dc.contributor.referee4: Montenegro, Raquel Carvalho
metadata.dc.contributor.referee5: Bezerra, Daniel Pereira
Resumo: INTRODUÇÃO: A leucemia mieloide aguda (LMA) é uma doença com baixa taxa de sobrevivência em 5 anos. Uma das razões para essa alta mortalidade é a resistência das células-tronco leucêmicas (CTLs) aos tratamentos convencionais, levando à recorrência da doença. A via de sinalização NF-κB está ativada nas CTLs de LMA, tornando-se um alvo atrativo para a eliminação dessas células. A emetina (EMT), um antiparasitário utilizado clinicamente, mostrou inibir a sinalização NF-κB. OBJETIVO: Avaliar o potencial antileucêmico da emetina em eliminar CTLs de LMA em modelo translacional in vitro e in vivo utilizando células KG-1a. METODOLOGIA: Inicialmente, EMT foi testada em um painel de células cancerosas e não cancerosas para determinar a CI50 e avaliar sua citotoxicidade. Em seguida, a presença e eliminação das CTLs foi identificada por citometria de fluxo, utilizando anticorpos para CD34, CD38, CD13, CD33, CD123, CD97 e CD99. Ensaios para investigar o mecanismo de ação do composto utilizando a linhagem KG-1a foram realizados, incluindo ensaio de exclusão por azul de tripan, análise do padrão de morte celular, expressão de caspase-3 e PARP-1, ativação da via NF-κB, avaliação do ciclo celular, estresse oxidativo e despolarização mitocondrial. Além disso, foram realizadas análises por microscopia confocal, qPCR e ensaio in vivo utilizando camundongos NSG. RESULTADOS: EMT mostrou citotoxicidade contra todas as linhagens cancerosas testadas, com uma CI50 de 0,74 µM para KG-1a. O composto também reduziu a porcentagem de células CD13, CD34, CD38, CD123, CD97 e CD99 positivas. Observou-se que EMT induziu morte celular apoptótica, aumentou a expressão de caspase-3 ativa e clivagem de PARP-1, promoveu a despolarização mitocondrial, geração de espécies reativas de oxigênio e fragmentação do DNA internucleosomal, além de inibir a expressão de NF-κB. Dos 92 genes analisados por qPCR, 54 foram regulados positivamente e 5 foram regulados negativamente pelo composto. No modelo de xenoenxerto, o tratamento com EMT reduziu a quantidade de células leucêmicas na medula óssea e sangue dos camundongos. CONCLUSÃO: EMT demonstrou ser um composto citotóxico promissor, capaz de eliminar as CTLs de LMA in vitro e in vivo, induzindo a expressão de caspase-3 ativa, clivagem de PARP-1, geração de espécies reativas de oxigênio, fragmentação do DNA internucleossomal e inibição da via NF-κB em células KG-1a.
Abstract: INTRODUCTION: Acute myeloid leukemia (AML) is a disease with a low 5-year survival rate. One of the reasons for this high mortality is the resistance of leukemic stem cells (CTLs) to conventional treatments, leading to disease recurrence. The NF κB signaling pathway is activated in AML CTLs, making it an attractive target for the elimination of these cells. Emetine (EMT), an antiparasitic used clinically, has been shown to inhibit NF-κB signaling. OBJECTIVE: To evaluate the antileukemic potential of emetine in eliminating AML LSCs in an in vitro and in vivo translational model using KG-1a cells. METHODOLOGY: Initially, EMT was tested on a panel of cancerous and non-cancerous cells to determine the IC50 and evaluate its cytotoxicity. Then, the presence and elimination of CTLs was identified by flow cytometry, using antibodies for CD34, CD38, CD13, CD33, CD123, CD97 and CD99. Assays to investigate the mechanism of action of the compound using the KG-1a strain were performed, including trypan blue exclusion assay, analysis of cell death pattern, expression of caspase-3 and PARP-1, activation of the NF-κB pathway, evaluation of the cell cycle, oxidative stress and mitochondrial depolarization. In addition, analyzes were performed by confocal microscopy, qPCR and in vivo assay using NSG mice. RESULTS: EMT showed cytotoxicity against all cancer lines tested, with an IC50 of 0.74 µM for the KG-1a. The compound also reduced the percentage of CD13, CD34, CD38, CD123, CD97 and CD99 positive cells. It was observed that EMT induced apoptotic cell death, increased the expression of active caspase-3 and PARP-1 cleavage, promoted mitochondrial depolarization, generation of reactive oxygen species and internucleosomal DNA fragmentation, in addition to inhibiting the expression of NF- κB. Of the 92 genes analyzed by qPCR, 54 were up-regulated and 5 were down-regulated by the compound. In the xenograft model, EMT treatment reduced the amount of leukemic cells in the bone marrow and blood of mice. CONCLUSION: EMT has shown to be a promising cytotoxic compound, able to eliminate AML LSCs in vitro and in vivo, inducing the expression of active caspase-3, cleavage of PARP-1, generation of reactive oxygen species, fragmentation of internucleosomal DNA and inhibition of NF-κB pathway in KG-1a cells.
Palavras-chave: Farmacologia
Células-tronco - Tumores
Alcaloides
Leucemia mieloide aguda
Emetina
Câncer - Tratamento
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIA
Idioma: por
País: Brasil
Editora / Evento / Instituição: Universidade Federal da Bahia
Sigla da Instituição: UFBA
metadata.dc.publisher.department: Faculdade de Farmácia
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Farmácia (PPGFAR) 
Tipo de Acesso: CC0 1.0 Universal
metadata.dc.rights.uri: http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/
URI: https://repositorio.ufba.br/handle/ri/38736
Data do documento: 19-Jul-2023
Aparece nas coleções:Tese (PPGFAR)

Arquivos associados a este item:
Arquivo Descrição TamanhoFormato 
Tese Suellen versão final - UFBA.pdf4,1 MBAdobe PDFVisualizar/Abrir
Mostrar registro completo do item Visualizar estatísticas


Este item está licenciada sob uma Licença Creative Commons Creative Commons