Ensaio de multiplex PCR para identificação de ácaros em cultura e amostras ambientais

Abstract

Os ácaros Blomia tropicalis e Dermatophagoides pteronyssinus desempenham um papel importante no desencadeamento de manifestações alérgicas. A identificação de ácaros é principalmente baseada na morfologia, uma técnica demorada e ambígua. O ácaro Glycycometus malaysiensis é alergênico e morfologicamente semelhante a B. tropicalis, o que torna crucial a identificação precisa dessas espécies. Neste estudo, projetamos um ensaio de reação em cadeia da polimerase multiplex (mPCR) baseado em DNA ribossomal (rDNA) para identificar os ácaros B. tropicalis, D. pteronyssinus e G. malaysiensis. Para isso, a região do espaçador transcrito interno 2 (ITS2), flanqueada por sequências parciais dos genes 5.8S e 28S, foi amplificada e sequenciada. As sequências obtidas foram alinhadas com sequências co-específicas disponíveis na base de dados Genbank visando o desenho de primers e estudos filogenéticos. Os resultados obtidos suportam que a região ITS2 apresenta uma boa resolução para identificação de espécies. Três pares de primers foram escolhidos para compor o mPCR, que foi utilizado para verificar a frequência dos ácaros estudados em vinte amostras de poeira domiciliar de residências na cidade de Salvador, nordeste do Brasil. Os dados mostraram que B. tropicalis foi o ácaro mais prevalente, encontrado em 95% das amostras, seguido por G. malaysiensis (70%) e D. pteronyssinus (60%), sendo que 55% das amostras abrigaram os três ácaros. Além disso, foi a primeira vez que G. malaysiensis foi identificado no Brasil e sua sequência ITS2 foi disponibilizada. O ensaio mPCR provou ser uma ferramenta rápida, confiável e simples para identificar esses ácaros e poderá ser aplicado em futuros estudos epidemiológicos ou diagnósticos, bem como para o controle de qualidade de produção de extratos de ácaros para serem usados em ensaios clínicos.