Avaliação dos biomarcadores imunológicos (razão de celulas t CD4+/CD8+ e expressão de MHC I por monócitos) em cadelas com carcinomas mamários

Abstract

Buscando uma melhor compreensão sobre o perfil dos leucócitos do sangue periférico e a suas correlações com o avanço do câncer de mama em cadelas, objetivou-se com a realização do presente estudo avaliar o potencial prognóstico/preditivo de biomarcadores imunofenotípicos (razão CD4+/CD8+ e expressão do IMF em monócitos), bem como, a eficácia da quimioterapia antineoplásica adjuvante a base de carboplatina, em cadelas portadoras de câncer de mama em estadio avançado ou com graduação histológica ≥ II. Foram avaliadas 100 cadelas, sendo 10 cadelas hígidas (grupo controle) e 90 cadelas portadoras de carcinomas mamários classificados histologicamente em dois grupos: (60) carcinomas em tumores mistos (MCT) e (30) outros carcinomas (MC). As pacientes foram submetidas a análise clinico-patológica, imunofenotipagem dos leucócitos do sangue periférico por citometria de fluxo, diagnóstico e graduação histopatológica do tumor, além da avaliação da taxa de sobrevida trimestral por até 2 anos após a cirurgia. Cadelas com estadiamento ≥ IV ou tumores com graduação histológica ≥ II foram submetidas a quimioterapia com carboplatina. A idade das cadelas estudadas variou entre cinco e 18 anos. Animais sem raça definida foram mais frequentes (55,5%), seguidos pela raça poodle (23,3%). Estadio III, apresentação multicêntrica, acometimento bilateral e envolvimento das mamas abdominais e inguinais foram predominantes. A análise microscópica revelou resposta inflamatória associada ao tumor do tipo linfohistiocitária multifocal moderada no grupo MCT e intensa no grupo MC, sendo os linfócitos a população predominante, seguida dos macrófagos. A imunofenotipagem revelou valores significativamente menores de linfócitos T e de suas subpopulações (TCD4+ e CD8+) nos grupos MCT e MC em relação ao controle. Percentuais de CD4+ e CD8+ foram significativamente menores em pacientes com tumores MCT grau II em comparação ao grau I. A razão CD4+/CD8+, os percentuais de linfócito B e CD14+ foram significativamente maiores nos grupos MCT e MC em relação ao controle. A intensidade média de fluorescência (IMF) do MHC I e II em monócitos foi significativamente maior no grupo MC em relação aos demais grupos. A avaliação das pacientes com base nos parâmetros propostos pelos biomarcadores razão CD4+/CD8+ e a expressão do IMF de 2 MHC I em monócitos possibilitou a segregação de cadelas com alta probabilidade de sobrevivência ou morte, para os grupos MCT e MC, respectivamente. A análise da curva ROC com pontos de corte que definem razão CD4+/CD8+ atestam bons parâmetros probabilísticos, com sensibilidade de 100%, especificidade de 93,18% e acurácia de 97,8%, enquanto para MHC I sensibilidade de 100%, especificidade de 86,21% e acurácia de 99,8%. Pacientes tratados com quimioterapia, independente do grupo tiveram sobrevida global maior. Estes pacientes tratados quando segregados pelo grupo histológico e com base nos parâmetros dos biomarcadores revelaram melhores respostas nos pacientes com razão CD4+/CD8+ ≤1.8 para grupo MCT e IMF de MHC I/CD14≤100 para grupo MC. A análise multivariada revelou poder prognóstico independente para o biomarcador IMF de MHC I/CD14. Com base nos resultados conclui-se que a razão CD4+/CD8+ e a expressão de MHC I em monócitos possuem tanto potencial prognóstico quanto preditivo para cadelas portadoras de carcinomas mamários. Contudo, é necessária a aplicação desses biomarcadores em seus grupos específicos de carcinomas, considerando também a associação a outros fatores prognósticos clássicos. Cadelas portadoras de tumores MCT com graduação histológica ≥ II devem ser submetidas ao tratamento quimioterápico adjuvante, mesmo na ausência de envolvimento nodal. A quimioterapia antineoplásica, a base de carboplatina, foi efetiva no alcance de maior sobrevida podendo ser indicada nos casos de tumores de mama, porém em alguns casos, não debelou a doença em curso.

The aim of this study was to evaluate the prognostic / predictive potential of immunophenotypic biomarkers (CD4+/CD8+ ratio and expression of the MIF in monocytes ) and to evaluate their correlation with the progression of mammary tumor in female dogs, as well as the efficacy of adjuvant antineoplastic chemotherapy based on carboplatin in female dogs with advanced or histological grade II mammary tumor. A total of 100 female dogs, 10 healthy female dogs (control group) and 90 female dogs with histologically classified mammary carcinomas were evaluated in two groups: (60) carcinomas in mixed tumors (MCT) and (30) other carcinomas (MC). Patients were submitted to clinical-pathological analysis, peripheral blood leukocyte immunophenotyping by flow cytometry, diagnosis and tumor histopathology, as well as evaluation of the quarterly survival rate for up to 2 years after surgery. Female dogs with staging = IV or tumors with histological grade = II were submitted to chemotherapy with carboplatin. The age of the female dogs studied ranged from 5 to 18 years. Non-breed animals were more frequent (55.5%), followed by the poodle breed (23.3%). Stage III, multicentric presentation, bilateral involvement and involvement of the abdominal and inguinal mammary glands were predominant. Microscopic analysis revealed an inflammatory response associated with a moderate multifocal lymphohistiocytic tumor in the MCT group and inter in the MC group, with lymphocytes being the predominant population, followed by macrophages. Immunophenotyping revealed significantly lower values of T lymphocytes and their subpopulations (T CD4+/and CD8+) in the MCT and MC groups in relation to the control. CD4+/and CD8+ ratios were significantly lower in patients with MCT grade II tumors compared to grade I. The CD4+/CD8+ ratio, the percentages of B and CD14 + lymphocytes were significantly higher in the MCT and MC groups in relation to the control. The mean fluorescence intensity (MIF) of MHC I and II in monocytes was significantly higher in the MC group compared to the other groups. The evaluation of the patients based on the parameters proposed by the biomarkers CD4+/ CD8 + ratio and the expression of the MHC I MIF in monocytes allowed the segregation of female dogs with a high probability of survival or death, for the MCT and MC groups, respectively. The analysis of the ROC curve with cut-off points that define CD4+// CD8 + ratio attests good probabilistic parameters, with a sensitivity of 100%, specificity of 93.18% and accuracy of 97.8%, while for MHC I sensitivity of 100%, specificity Of 86.21% and accuracy of 99.8%. Patients treated with chemotherapy, independent of the group had greater overall survival. These patients treated when segregated by the histological group and based on the biomarkers parameters revealed better responses in patients with ratio = 1.8 for MCT and IHC group of MHC I / CD14 = 100 for MC group. Multivariate analysis revealed independent prognostic power for the MHC I / CD14 biomarker.Based on the results, it is concluded that the CD4+/CD8+ ratio and the MHC I expression. in monocytes have both prognostic and predictive potential for female dogs carrying mammary carcinomas. However, the application of these biomarkers in their specific groups of carcinomas is necessary, considering also the association with other classic prognostic factors. MCT tumors with histological grade = II should undergo adjuvant chemotherapy, even in the absence of nodal involvement. The antineoplastic chemotherapy, based on carboplatin, was effective in achieving greater survival and could be indicated in cases of mammary tumors, but in some cases, it did not stop the ongoing disease. Keyword: Female dogs;immune system;chemotherapy;mammary tumors