Dinâmica de formação da matriz extracelular em queimaduras de segundo grau padronizadas no dorso de ratos (Rattus Norvegiccus, linhagem Wistar) tratadas com laserterapia (AlGaInP λ=660nm) associada ou não à membrana de biocelulose bacteriana

Abstract

O presente estudo teve como objetivo avaliar a dinâmica de formação da matriz extracelular no processo de reparo de queimaduras de segundo grau padronizadas, em dorso de ratos (Rattus norvegiccus, linhagem Wistar), tratadas com a laserterapia com laser de fosfeto de índio-gálio-alumínio (AlGaInP) associada ou não à membrana de celulose (NEXFILL®). Quarenta e oito animais foram alocados em quatro grupos, como segue: Grupo Controle (sem tratamento), Grupo I (tratamento com Laser AlGaInP, λ=660nm), Grupo II (tratamento com biomembrana de celulose NEXFILL®) e Grupo III (tratamento com laser AlGaInP, λ=660nm associado à biomembrana de celulose NEXFILL®). As irradiações foram realizadas imediatamente após a confecção da queimadura e a cada 48 horas, até um dia antes da morte dos animais, que se deu às 24 horas, 3 dias, 7 dias e 14 dias. As lesões foram excisadas e analisadas em microscopia de luz. A formação de matriz extracelular foi avaliada através do método imuno-histoquímico polimérico (AdvanceTM, Dako Corporation), utilizando anticorpos direcionados contra as proteínas colágeno tipo III, colágeno tipo I, fibronectina e laminina. Os grupos foram comparados utilizando o teste de proporções de Fisher (p<0.05). Observou-se maior quantidade de colágeno tipo III nos grupos controle, II e III, quando comparados ao grupo I (p<0.05). Em relação ao colágeno tipo I, os grupos I e III apresentaram uma maior deposição dessa proteína em relação ao grupo II (p<0.05). Porém não houve diferença na deposição do colágeno I entre os grupos I e III e o grupo controle. Além disso, um maior preenchimento por fibronectina foi descrito para o grupo III quando comparado ao grupo II (p<0.05). Quanto ao padrão de marcação da laminina na lâmina basal, o grupo I se mostrou com um padrão de descontinuidade e esse resultado foi significante quando esse grupo foi comparado com os grupos controle, II e III (p<0.05). Neste estudo, não foi observada uma ação do laser isoladamente (Grupo I) na dinâmica de deposição dos colágenos III e I, bem como no padrão das fibras colágenas (fibrilar e/ou reticular) e aceleração do reparo das lesões de queimaduras de segundo grau induzidas no dorso dos ratos. A continuidade da marcação de laminina na membrana basal subepitelial nos grupos II e III sugere que a membrana de celulose isoladamente ou em associação com o laser favoreceu a reepitelização de queimaduras de segundo grau.

The present study aimed to evaluate the dynamics of deposition of extracellular matrix proteins in the healing process of second-degree burn patterned in the dorsum of rats (Rattus norvegiccus, Wistar). The wounds were treated with lasertherapy using laser indium phosphide-gallium-aluminum (AlGaInP) associated or not with biological cellulose membrane (NEXFILLTM). Forty-eight animals were further divided into four groups as follows: Control group (without treatment), Group I (treatment with AlGaInP laser, λ=660nm), Group II (treatment with biological cellulose membrane NEXFILLTM) and Group III (treatment with AlGaInP laser, λ=660nm associated with biological cellulose membrane NEXFILLTM). Irradiations were performed immediately after the induction of the burn and every 48 hours, up to a day before the death of the animals, which occurred at 24 hours, 3 days, 7 days and 14 days. The lesions were excised and analyzed by light microscopy. Extracellular matrix deposition was assessed by immunohistochemistry using a polymer system (AdvanceTM, Dako Corporation) and antibodies directed against the following proteins: collagen type III and type I, fibronectin and laminin. Differences among the groups were assessed using the Fisher Test (p<0.05). We observed a higher amount of collagen type III in the groups Control, II and III, when they were compared to Group I (p<0.05). Groups I and III showed higher deposition of collagen I when they were compared to group II (p<0,05), but the amount of collagen I was similar in groups I, III and Control. Group III exhibited a higher filling of fibronectin in comparison to Group II (p<0.05). With respect to laminin, Group I exhibited a predominant pattern of discontinuity in basal lamina comparing with control, II and III groups (p<0,05). In conclusion, in this study, the laser used alone (Group I) has not influenced the deposition of collagens III and I as well as on the pattern of fibers (fibrillar and/or reticular). In addition, the laser did not accelerated the repair of seconddegree burn-induced lesions. Continuous labeling of laminin in groups II and III suggests that the biological cellulose membrane promoted a better reepithelialization of these wounds.