Avaliação da imunoreatividade de soros caninos a dois extratos solúveis de Brucella canis

Abstract

A brucelose canina é uma infecção bacteriana contagiosa, zoonótica, causada pela Brucella canis, responsável por aborto e infertilidade. A brucelose é uma doença de importância mundial pelo prejuízo ocasionado tanto para a saúde publica como para a economia nacional. O diagnóstico baseia-se principalmente na sorologia devido a inespecificidade dos sinais clínicos. Vários métodos têm sido descritos e utilizados para diagnóstico, porém a maioria comercialmente disponível produz resultados falsos positivos. Neste trabalho foi comparado o perfil de reconhecimento de Ig G sérica a dois extratos solúveis de Brucella canis, preparados de diferentes formas. Os soros foram analisados por ELISA Indireto com os dois extratos solúveis obtidos por calor e Ultra-som. Foram testadas 765 amostras de soros de cães domiciliados da cidade de Salvador e área metropolitana com sorologia desconhecida, 92 amostras de soros testadas no Centro de Controle de Zoonoses da cidade de São Paulo (CCZ-SP) pelo método IDGA com antígeno de Brucella ovis sendo 45 positivas e 47 amostras negativas. Para o cálculo do valor de corte foram utilizadas 21 amostras de soros de filhotes de cães saudáveis provenientes do biotério do Centro de Pesquisa Gonçalves Muniz (CPqGM-Fiocruz) – Salvador –Ba. O perfil eletroforetico foi analisado por SDS-PAGE em sistema desnaturante e a reatividade dos antígenos solúveis foi avaliada pelo ELISA e Western Blotting, comparando diferentes grupos de soros. A comparação entre os ELISAs com ambos antígenos foi feito com todos os 857 soros. O ELISA com extrato solúvel obtido por calor indicou uma positividade de 10% (n=79) com valor de D.O de limite de corte de 0,235, já o ELISA com extrato solúvel obtido por ultra-som indicou uma positividade de 24% (n=187) com valor de D.O de limite de corte de 0,350. A análise estatística de correlação dos resultados encontrados nos estudos dos dois antígenos obtido por calor e ultrasom foi de 0,68. Os 92 soros do CCZ-SP testados pela IDGA foram utilizados para avaliar a especificidade, sensibilidade, valores preditivos positivo e negativo e eficiência dos ELISAs, sendo 51%,94%, 89%, 67% e 73% para o ELISA com extrato obtido por calor e de 69%, 83%, 80%,74% e 76% para o ELISA com o extrato obtido por ultra-som, respectivamente. A concordância entre os ELISAs utilizando os dois extratos solúveis dada pelo índice Kappa foi de κ= 0,38. O Elisa realizado com extrato solúvel obtido por calor mostrou concordância com a IDGA de κ=0,45 e o ELISA utilizando extrato solúvel obtido por ultra-som e a IDGA com κ= 0,52. A imunoreatividade do extrato antigênico solúvel de B. canis obtido por calor (extrato aquecido), utilizando soros de animais positivos na IDGA e ELISA, apresentou com maior freqüência as bandas 65 KDa, 58 KDa, 56 KDa, 18 KDa e 12 KDa e o extrato obtido por ultra-som as bandas 68 KDa, 52 KDa, 46 KDa, 38 KDa, 28 KDa, 18 KDa. Os antígenos utilizados para os ELISAs aquecido e sonicado, mostram diferentes perfis eletroforético em análise pela técnica SDSPAGE, sugerindo diferentes composições protéicas. Os extratos analisados por ELISA, apesar de apresentarem bons valores de controle de qualidade, sendo o de ultra-som melhor que os aquecidos, necessitam ser avaliados quanto a sua reatividade com soros de animais com diagnóstico de brucelose canina confirmados por isolamento bacteriano ou por PCR.