Detection of parasite antigens in Leishmania infantum infected spleen tissues by piezoelectric based immunosensors

Abstract

Doenças como a leishmaniose é uma importante causa de morbidade e mortalidade no Brasil e seus diagnósticos devem ser melhoradas. A produção de anticorpos monoclonbais anti-L. infantum e acoplamento ao sensor piezoelétrico, para formar um dispositivo bioeletrônicos capaz de detectar rapidamente antígenos de Leishmania sp, tanto qualitativa como quantitativamente, é uma alternativa promissora para o diagnóstico da leishmaniose, devido à sua alta especificidade e sensibilidade, portabilidade e baixo custo, em comparação aos métodos convencionais. Objetivo: Desenvolver um imunossensor capaz de detectar antígenos de L. infantum em tecidos de animais infectados. Material e Método: Quatro hibridomas produtores de anticorpos monoclonais anti-amastigota de L. infantum teve sua especificidade confirmada por ELISA. Esses anticorpos foram imobilizados sobre um cristal piesoelétrico de quartzo através de uma fina camada de 2-aminoetanotiol (cisteamina) e glutaraldeído, e submetidos a injeções de extratos de baço de hamster infectados e não-infectados com L. infantum. Resultados: Quatro anticorpos (5A9H8, 2B7B8, 4B6F7 e 5AB3A10B4), todos da classe IgG, foram acoplados à superfície do transdutor e foram capazes de reagir contra extrato de baço de hamster infectado com L. infantum. A metodologia desenvolvida foi capaz de detectar 3,5x10 4 amastigotas por grama de tecido infectado com os anticorpos 5A9H8, 4B6F7 e 5AB3A10B4, e 1,75x10 4 com o anticorpo 2B7B8. Conclusões: Os resultados demonstraram que este teste pode ser útil para quantificar amastigotas de L. infantum em órgãos de animais experimentais para estudos sobre a patogênese da leishmaniose visceral americana e é uma ferramenta promissora para desenvolver um diagnóstico de leismanioses humana e canina.