A Linfadenite Caseosa (LC), doença infecciosa causada pela bactéria Gram positiva
Corynebacterium pseudotuberculosis em caprinos e ovinos, é altamente prevalente em
rebanhos de pequenos ruminantes mundialmente. Diversos prejuízos econômicos,
representados pela diminuição do valor do couro, condenação de carcaças e falhas
reprodutivas, já foram associados com a ocorrência da doença. As técnicas atualmente
disponíveis de diagnóstico clínico e laboratorial da doença carecem de disponibilidade
mercadológica ou de sensibilidade e, com isso, animais infectados podem permanecer no
rebanho servindo de fonte de infecção para os outros animais. A Ressonância Magnética
Nuclear (RMN) e a quimiometria são técnicas que podem identificar metabólitos não
detectáveis por técnicas clássicas de diagnóstico laboratorial. O presente estudo teve como
objetivo determinar marcadores da infecção por C. pseudotuberculosis em caprinos utilizando
métodos clássicos (parâmetros clínicos, hematológicos, bioquímicos), sorológicos, RMN e
quimiometria. Foi utilizado um rebanho de 173 caprinos da raça Canindé, dos quais foram
coletadas as amostras de sangue e soro para as análises. Os animais foram classificados como
não infectados controle (C), assintomáticos (A) e sintomáticos (S), de acordo com o
isolamento microbiológico, a partir do conteúdo de lesões caseosas e ensaio sorológico
(ELISA). Foram realizados hemogramas completos, ensaios de bioquímica clínica para
determinação da concentração de compostos séricos; análises de 1H RMN por NOESY
(Nuclear Overhauser Effect SpectrosopY) e CPMG (Carr-Purcell Meiboom-Gill) e
quimiometria por Análise Discriminante por Quadrados Mínimos Parciais (PLS-DA) para
verificação e possíveis biomarcadores para a doença. Foi observada alta disseminação de
infecção por C. pseudotuberculosis nesse rebanho, com 86,13% de animais positivos, sendo
desses 74,57% assintomáticos e 11,56% sintomáticos. Nas análises de hemograma e
leucograma, houve diferença estatística no nível de ureia sérica no grupo de assintomáticos
maior do que animais não infectados. Na avaliação de 62 amostras de soro por RMN e
quimiometria, as técnicas empregadas foram satisfatórias na discriminação dos grupos de
animais, sendo também complementares e confirmatórias entre si, demonstrando possíveis
biomarcadores para LC. Foram identificados 20 metabólitos de interesse pela técnica de
NOESY e 29 por CPMG, abrindo-se possibilidades promissoras para estabelecimento das
técnicas de RMN e quimiometria como adequadas para método diagnóstico da doença, tanto
pelas vantagens das técnicas quanto pelos resultados aqui reportados pela primeira vez em caprinos.
ABSTRACT
Caseous lymphadenitis (CL), an infectious disease caused by the Gram-positive bacterium
Corynebacterium pseudotuberculosis in goats and sheep, is highly prevalent in small
ruminant herds worldwide. Several economic losses, represented by the decrease in the value
of leather, condemnation of carcasses and reproductive failures, have already been associated
with the occurrence of the disease. Currently available techniques for clinical and laboratory
diagnosis of the disease lack market availability and/or sensitivity and, therefore, infected
animals can remain in the herd, serving as a source of infection for other animals. Nuclear
Magnetic Resonance (NMR) and chemometrics are techniques that can identify metabolites
not detectable by classical laboratory diagnostic techniques. The present study aimed to
determine markers of C. pseudotuberculosis infection in goats using classical methods
(clinical, hematological, biochemical), serological, NMR and chemometry. A herd of 173
Canindé goats was used, from which blood and serum samples were collected for analysis.
The animals were classified as uninfected control (C), asymptomatic (A) and symptomatic
(S), according to microbiological isolation, based on the content of caseous lesions and
serological assay (ELISA). Complete blood counts, clinical biochemistry tests were
performed to determine the concentration of serum compounds; 1H NMR analyzes NOESY
(Nuclear Overhauser Effect SpectrosopY) and CPMG (Carr-Purcell Meiboom-Gill) and
Partial Least Square Discriminant Analysis chemometry (PLS-DA) for verification and
possible biomarkers for the disease. A high dissemination of the infection by C.
pseudotuberculosis was observed in the herd, with 86.13% of positive animals, being 74.57%
asymptomatic and 11.56% symptomatic. In the hemogram and clinical biochemistry analyses,
the only statistical difference found was the higher level of serum urea in asymptomatic
individuals than in non-infected animals. In the evaluation of 62 serum samples by NMR, the
techniques employed were satisfactory in discriminating the groups, being also
complementary and mutually confirming, demonstrating possible biomarkers for CL. Twenty
metabolites of interest were identified by NOESY and 29 by CPMG, opening up promising
possibilities for the establishment of NMR and chemometric techniques as CL suitable
diagnosis methods, both because of the advantages of the techniques and the results reported
herein for the first time in goats.
