Expressão de miRNAs envolvidos na regulação de genes que participam do dano tecidual causado por Leishmania braziliensis

Abstract

A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecciosa parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania e está entre as endemias com maior impacto em saúde pública, devido à sua distribuição globalizada e limitações referentes ao diagnóstico, tratamento e controle em áreas endêmicas. Nos últimos anos, estudos tem mostrado a capacidade de Leishmania spp alterar o transcriptoma de células e tecidos infectados, modulando a expressão de RNAs codificantes e não codificantes do hospedeiro. OBJETIVO: Avaliar em pele e plasma a expressão de miRNAs reguladores de genes super expressos em biópsias de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) causada por Leishmania braziliensis. MÉTODOS: Foram obtidas duas biópsias de pele de vinte e cinco pacientes com LC infectados por L. braziliensis (pele lesionada e pele sadia) e doze amostras de plasmas de indivíduos com LC e controles sadios. Para extração do RNA de pele e plasma utilizamos os métodos do TRIzol e o kit comercial MagMAX™ mirVana™ (Thermo Fisher), respectivamente. Para obtenção de DNA complementar (cDNA) utilizamos o kit comercialmente disponível TaqMan® Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit (Thermo Fisher). Os níveis de expressão de miRNAs em biópsias cutâneas e plasma foram detectados por qRT-PCR usando ensaios TaqMan pré-desenhados (Thermo Fisher). Os dados foram analisados utilizando o teste não paramétrico de Mann-Whitney para comparação dos dados de pele com LC e normal, além de correlação de Spearman, analise de sobrevida pelo método de Kaplan-Meier e curva ROC utilizando o software GraphPad Prism 5 para avaliação entre o perfil de expressão dos miRNAs e os parâmetros clínicos avaliados. RESULTADOS: Não observamos expressão dos miRNAs selecionados no plasma. Em relação às biópsias, dos quatorze miRNAs testados, quatro mostraram expressão nos tecidos: miR-361-3p, -103a-2-5p, -140-3p e -205-3p. Os miRNAs miR-361-3p e -140-3p foram significativamente mais expressos nas lesões de LC quando comparados a amostras de pele normal, (p= 0,0001 e p< 0,0001, respectivamente). Em adição, observamos uma associação entre a expressão do miR-361-3p e falha terapêutica (p= 0,0071) e correlação direta entre a expressão do miR-361-3p e com um maior tempo de cura das lesões nos pacientes avaliados (r= 0,5 e p= 0,007). Adicionalmente, análises complementares mostraram que o miR-361-3p é capaz de identificar com boa sensibilidade (81,2%) e especificidade (100%) pacientes que tendem a falhar ao tratamento inicial com Sbv (área sob a curva ROC 0,95; p= 0,006). Finalmente, a curva de sobrevivência levando o tempo de cura como desfecho mostrou que quanto maior a expressão do miR-361-3p, maior o tempo de cicatrização das úlceras de LC. CONCLUSÕES: O miR-361-3p e miR-140-3p possuem um perfil de expressão diferenciado nas lesões de LC em relação à pele normal de pacientes infectados por L. braziliensis, mostrando que a regulação de miRNAs é importante na patogênese da LC; O miR-361-3p foi correlacionado com falha terapêutica e com maior tempo de cura da doença, evidenciando o seu potencial como biomarcador de prognóstico na LC causada por L. braziliensis.