Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente causador da linfadenite caseosa dos caprinos e ovinos, enfermidade associada a perdas econômicas diretas no setor pecuário. Além de ter um curso crônico, o seu tratamento com antibióticos é inviável e não existem vacinas eficazes disponíveis no mercado. Neste experimento, foram utilizadas condições de cultivo in vitro que se aproximassem do ambiente das condições in vivo encontradas pela bactéria durante a infecção do hospedeiro; isto incluiu a utilização de material biológico animal como meio de cultura e a restrição do ferro livre no meio. Nessas condições, era esperado que o C. pseudotuberculosis expressasse perfis proteicos de membrana ainda desconhecidos. Par isso foram utilizadas linhagens bacterianas de baixa (T1) e alta (VD57) virulência, cultivadas em caldo BHI, MQD, MQD suplementado com ferro, RPMI, RPMI suplementado com soro ovino e um meio produzido com material biológico ovino, todos estes com e sem suplementação de agentes quelantes de ferro. As massas bacterianas foram coletadas durante as fases Log e estacionária da curva de crescimento da bactéria, para que fosse conduzida a extração das moléculas de membrana com o uso de solventes orgânicos. Este procedimento gerou uma fração denominada antígenos de menbrana, rica em glicoproteínas. O perfil proteico variou de acordo com o meio utilizado, sendo que algumas bandas coradas na eletroforese aparecem em muitos meios; identificamos possíveis fatores de virulência in silico (ciuABCDE, fagABCD e oppBCDA), já descritas por outros autores; um teste imunoenzimático foi produzido com os antígenos de menbrana com especificidade de 100% e sensibilidade de 80%. Portanto foi possível produzir informações importantes para uma futura vacina e produção testes diagnósticos.
Corynebacterium pseudotuberculosis is the causative agent of caseous lymphadenitis of goats and sheep, a disease associated with direct economic losses in the livestock sector. In addition to having a chronic course, your antibiotic treatment is infeasible and there are no effective vaccines available on the market. In this experiment, in vitro culture lengths approaching the environment conditions, in vivo found by the bacterium during host infection; is a use of animal biological material as a culture medium and a restriction of free iron in the medium. Under these conditions, C. pseudotuberculosis was expected to express unfamiliar membrane protein profiles. (T1) and high (VD57) virulence, cultured in BHI broth, MQD, MQD supplemented with iron, RPMI, RPMI supplemented with sheep serum and a product produced with ovine biological material, all with and without supplementation of iron chelating agents. As bacterial masses were collected during the Log and stationary phases of the growth curve of the bacterium, to be conducted an extraction of the membrane molecules with the use of organic solvents. This procedure generated a fraction called glycoprotein-rich membrane antigens. The protein profile varied according to the medium used, and some stained bands in the electrophoresis appear in many media; we identified possible in silico virulence factors (ciuABCDE, fagABCD and oppBCDA), already described by other authors; An immunoenzymatic test produced with menarche antigens with specificity of 100% and sensitivity of 80%. It was necessary to provide important information for a future vaccine and production of diagnostic testes.
