Estudos Sobre o Imunodiagnóstico da Linfadenite Caseosa e da Toxoplasmose em Pequenos Ruminantes

Abstract

A linfadenite caseosa (causada por C. pseudotuberculosis) e a toxoplasmose (causada pelo Toxoplasma gondii) zoonoses infecciosas responsáveis por graves perdas econômicas na indústria de caprinos e de ovinos. Em pequenos ruminantes, a linfadenite é caracterizada pelo desenvolvimento de granulomas nos gânglios linfáticos, e a toxoplasmose é importante devido a problemas reprodutivos. O diagnóstico precoce e correto de ambas as doenças é de grande importância para seus controles em rebanhos. Este trabalho teve como objetivo a padronização de imunoensaios enzimáticos (ELISA) para a detecção de anticorpos anti-C. pseudotuberculosis específicos em ovinos e anti-T. gondii em caprinos. Para o primeiro estudo, 90 amostras de soros de ovinos, sendo 45 com infecção confirmada pelas bactérias e 45 negativos a partir de regiões não endêmicas, foram testadas em um sistema imunoenzimático utilizando antígenos somático e excretados / secretados de C. pseudotuberculosis, cepas 1002 e FRC41. Dos quatro antígenos testados, os melhores resultados foram obtidos com o antígeno secretado a partir da cepa FRC41, com 97,8% de especificidade, sensibilidade de 90% e a precisão de 96,8%. Na segunda experiência, 80 amostras de soro de caprinos, sendo 40 positivos e 40 negativos quanto à presença de anticorpos específicos de IgG anti-Toxoplasma gondii pelo ensaio padrão ouro, imunofluorescência indireta, foram usadas como amostras de referência. A técnica ELISA indireto desenvolvido mostrou uma sensibilidade de 74,1%, 97,5% de especificidade e precisão de 0,952. O teste também se apresentou 100% de reprodutibilidade para animais positivos e negativos; 91,3% e 93,9% repetitividade para amostras positivas e negativas, respectivamente. Conclui-se que as duas técnicas desenvolvidas são boas ferramentas de diagnóstico, embora esforços devam ser empregados para melhorar a sua eficiência. A utilização de antígenos recombinantes da cepa FRC41 é de grande interesse para realização de produção de antígeno mais apropriada.

Caseous lymphadenitis (caused by C. pseudotuberculosis) and toxoplasmosis (caused by Toxoplasma gondii) are infectious zoonosis diseases responsible for serious economic losses in the goat and sheep industry. In small ruminants, lymphadenitis is characterized by the development of granulomas in lymph nodes, and toxoplasmosis is important due to reproductive problems. Early and correct diagnosis of both diseases is of great importance to its controls in herds. This work aimed the standardization of enzyme immunoassays (ELISA) for the detection of anti-C. pseudotuberculosis specific antibodies in sheep and anti-T. gondii antibodies in goats. For the first study, 90 sheep sera samples, being 45 with confirmed infection by the bacteria and 45 negative from non-endemic regions, were tested in an immunoenzymatic system using somatic and excreted/secreted antigens from 1002 and FRC41 C. pseudotuberculosis strains. Of the four tested antigens, the best results were obtained with the secreted antigen from the FRC41 strain, with 97.8% specificity, 90% sensitivity and accuracy of 96.8%. In the second experiment, 80 goat sera samples, being 40 positive and 40 negative for the presence of IgG anti-Toxoplasma gondii specific antibodies by the indirect immunofluorescence gold standard assay, were used as reference samples. The developed indirect ELISA technique showed a sensitivity of 74.1%, 97.5% specificity and accuracy of 0.952. It also met 100% reproducibility for positive and negative animals; 91.3% and 93.9% repeatability for positive and negative samples, respectively. We conclude that the two developed techniques are good diagnostic tools, although efforts should be employed to improve their efficiency. The use of FRC41 strain´s recombinant antigens is of great interest with the objective to perform a more suitable antigen production.